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    帶您了解紫外可見分光光度計

    發(fā)布時間: 2018-12-27  點(diǎn)擊次數(shù): 1622次

    一、工作原理
    分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
    分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
    根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比,比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響,即得朗伯-比耳定律。即A=εbc,(A為吸光度,ε為摩爾吸光系數(shù),b為液池厚度,c為溶液濃度)就可以對溶液進(jìn)行定量分析。
    將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì),則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒有標(biāo)樣,也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確,精密度高,且測定條件要相同。
    實驗證明,不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度,以確定選擇哪一種溶劑。
    二、紫外可見分光光度計的工作環(huán)境
    1)分光光度計安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5-35℃,相對濕度不超過85%
    2)儀器應(yīng)放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,且避免強(qiáng)烈的震動或持續(xù)的震動
    3)室內(nèi)照明不宜太強(qiáng),且應(yīng)避免直射日光的照射
    4)電扇不宜直接向儀器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用
    5)盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電氣設(shè)備
    6)避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用
    二、減除紫外可見分光光度計因素誤差的措施
    1、減除入射光束單色性不純的影響
    各種不同的分光光度分析儀器除了本身的質(zhì)量決定其單色光的純度不同外,使用或操作也會影響單色光的純度,例如對同一臺分光光度計,由于出射狹縫調(diào)節(jié)不當(dāng)就會使單色光純度差。因此除了應(yīng)該根據(jù)分析的要求選擇適當(dāng)?shù)膬x器外,還必須正確的使用儀器。
    2、減除雜散光的影響
    雜散光的主要來源是儀器的光學(xué)元件保護(hù)不好,例如透鏡或反射鏡上有塵埃或指紋印。分光光度計光學(xué)系統(tǒng)的暗箱中的黑體被劃傷或脫落,在操作時樣品室蓋未蓋好等。因此要消除雜散光應(yīng)注意以下幾點(diǎn)。
    1)做好分光光度計(特別是光學(xué)系統(tǒng))的防潮和防霉工作。不允許用手或其他硬物摸碰光學(xué)元件和暗箱的黑體
    2)保護(hù)好吸收池架,并應(yīng)經(jīng)常保持其清潔和干燥
    3)測定時,必須蓋好樣品室蓋
    3、減除吸收池誤差
    吸收池的質(zhì)量(主要是精度)不好或使用不當(dāng)都會給測定結(jié)果帶來誤差。即使是同一組的數(shù)個同規(guī)格的吸收池,也不能保證其光程長度相等,只是其誤差在一定的范圍之內(nèi)。為了減除由此而產(chǎn)生的誤差,使用時應(yīng)對吸收池進(jìn)行校正。

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